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FITC标记试剂盒标记50μg蛋白质的操作规程

发布时间: 2022-08-04  点击次数: 25次
  FITC标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。
  
  标准操作规程(标记50μg蛋白质):
  
  将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心,并在开始结合前立即准备所需的溶液。以下SOP是标记抗HDACIgG抗体的实例。
  
  准备蛋白质溶液(溶液A):
  
  为了标记50μg蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg/mL),将5μL(总反应体积的10%)反应缓冲液(组分B)与50μL目标蛋白质溶液混合。
  
  注意:如果蛋白质浓度不同,请相应调整蛋白质体积,使50μg蛋白质可用于标记反应。
  
  为了标记100μg蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg/mL),将10μL(总反应体积的10%)反应缓冲液(组分B)与100μL目标蛋白质溶液混合。
  
  蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中,必须用1XPBS(pH7.2-7.4)透析,或使用AmiconUltra-0.5,Ultracel-10膜,10kDa去除游离胺或铵盐广泛用于蛋白质沉淀。
  
  用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好的标记。如果蛋白质浓度低于1mg/mL,结合效率会显着降低。FITC标记试剂盒为获得标记效率,建议蛋白质浓度范围为1-2mg/mL。

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