FITC标记试剂盒标记50μg蛋白质的操作规程

　　FITC标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。

　　

　　标准操作规程（标记50μg蛋白质）：

　　

　　将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前立即准备所需的溶液。以下SOP是标记抗HDACIgG抗体的实例。

　　

　　准备蛋白质溶液（溶液A）：

　　

　　为了标记50μg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg/mL），将5μL（总反应体积的10％）反应缓冲液（组分B）与50μL目标蛋白质溶液混合。

　　

　　注意：如果蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使50μg蛋白质可用于标记反应。

　　

　　为了标记100μg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg/mL），将10μL（总反应体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100μL目标蛋白质溶液混合。

　　

　　蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1XPBS（pH7.2-7.4）透析，或使用AmiconUltra-0.5，Ultracel-10膜，10kDa去除游离胺或铵盐广泛用于蛋白质沉淀。

　　

　　用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好的标记。如果蛋白质浓度低于1mg/mL，结合效率会显着降低。FITC标记试剂盒为获得标记效率，建议蛋白质浓度范围为1-2mg/mL。