为什么要使用固定破膜剂？如何选择？

　　固定破膜剂可以在固定细胞的同时对细胞膜上的脂质、蛋白进行溶解和凝结，以达到固定破膜的效果。但固定破膜试剂的成分和剂量不同，所能达到的效果和适用的实验也是不同的。

　　

　　我们在鉴定细胞亚群的时候需要通过该亚群特异性表达的细胞因子来证明，而用流式检测细胞因子更能准确的区分不同细胞群，甚至能发现新的亚群。

　　

　　常检测的细胞亚群Th1、Th2、Th17特异性指标分别为IFN-γ、IL-4、IL-17A，都是胞内的细胞因子，所以需要固定细胞并在细胞膜上打孔才能检测到。

　　

　　为何要用固定破膜剂？正常情况下，荧光标记的抗体无法通过完整的细胞膜进入细胞内，用流式细胞仪测定细胞内抗原，需先利用破膜剂破坏细胞膜的完整性，产生可供抗体通过的小孔。破膜效果的好坏将直接影响荧光染色和结果分析。

　　

　　细胞合成细胞因子后会通过内质网和高尔基体将因子转运到胞外以与其他细胞取得联系，所以流式细胞术作为单个细胞的检测技术是无法检测到已被释放到胞外的细胞因子的。

　　

　　554715和555028在554714的基础上添加了不同的蛋白转运抑制剂，抑制细胞因子释放，提高细胞因子的胞内信号。554715含莫能霉素，通过破坏细胞高尔基体来抑制胞内蛋白转运；555028含布雷非德菌素，可特异性的可逆的阻断蛋白质从内质网转运到高尔基体。

　　

　　固定破膜剂的选择原则：

　　

　　1、尽量保持细胞形态，使可根据散射光信号分析细胞种类，如区分淋巴细胞、单核细胞和粒细胞；

　　

　　2、不影响细胞膜表面抗原与抗体的特异性结合（若需同时检测细胞内外抗原）。