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Foxp3/转录因子染色固定破膜试剂盒的操作方法

发布时间: 2022-09-27  点击次数: 148次
Foxp3/转录因子染色固定破膜试剂盒是一款经过优化的专门针对转录因子、核蛋白(例如Foxp3和STAT3)以及细胞因子和趋化因子等流式抗体进行细胞内抗原染色时所用的固定、破膜试剂。
操作方法:
1.取100μL细胞/管(约1×106个细胞)于流式管内。
2.[可选步骤] 根据说明书进行Fixable Viability Dye(死活细胞鉴定染料)染色。
3.按照抗体说明书加荧光标记抗体染细胞表面Marker。
4.孵育完成后加入1mL细胞染色缓冲液,300g离心5min,弃上清,再加入100uL细胞染色缓冲液重悬细胞。
5.加入1mL 1× Fixation Working Solution,涡旋混匀,4℃反应30min,反应完后,600g离心5min,弃上清。
6.加入2mL 1× Permeabilization Working Solution,涡旋混匀,600g离心5min,弃上清。
7.重复步骤6。
8.加入100μL 1×Permeabilization Working Solution重悬细胞。
9.[可选步骤] 加2µL 2%正常小鼠/大鼠血清于细胞悬液中封闭Fc受体,室温下孵育15min。
10.按照抗体使用说明书加荧光标记的核染色抗体,混匀后室温避光孵育30min。
11.加入2mL 1×Permeabilization Working Solution,600g离心5min,弃上清。
12.加入适量细胞染色缓冲液重悬细胞,即可上机检测。

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