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FITC标记试剂盒如何实现一步法核酸标记?

发布时间: 2023-02-06  点击次数: 40次
  细胞转染后想评估转染效率,不用非要构建荧光表达质粒这么麻烦,我们还可以通过核酸标记来实现。
  
  FITC标记试剂盒是市场首项“一步法”核酸标记技术,采用的是一种非酶化学方法,可以将荧光或非荧光标记物通过一步法化学反应直接标记在DNA或RNA上,且不影响核酸的杂交、表达等下游实验,非常的方便快捷。同时,标记的荧光或非荧光标记物可以便于转染效率监测,体内、体外示踪,分子杂交等应用。
  
  那么什么是一步法核酸标记呢?它的秘密就在标记物的设计上。
  
  FITC系列标记物由三部分结构组成,分别是:荧光基团或半抗原(绿色部分),Linker(黄色部分,促进与核酸的静电相互作用)和活性烷基化基团(蓝色部分,将FITC试剂共价连接到核酸内的任何活性杂原子上)。
  
  当标记物与待标记核酸混合后,在37℃条件下孵育1小时,FITC标记物就能通过共价结合方式,不可逆地标记在DNA或RNA链上,反应流程如下所示。由于FITC标记方法不会破坏核酸序列及其结构完整性,使得该技术可以广泛应用于体内和体外分子生物学实验。
  
  如何选择FITC标记试剂盒?
  
  FITC标记试剂(µl):核酸(µg)比率(v:w)是每个试剂盒各自方案中规定的推荐起始值。在标准FITC标记反应(37°C,1小时孵育)中使用此起始比率,可以预期达到表中列出的标记密度。重要的是,我们还可以通过调整比例和/或反应时间轻松调整标记密度。

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