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生物素标记试剂盒标记特异性抗体的制备

发布时间: 2022-08-17  点击次数: 17次
  生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂,用于含有氨基(NH2-)抗体的标记。长臂可降低多个生物素化分子与同一亲和素分子复合物结合时的空间位阻,能够有效优化标记和检测效果。
  
  生物素标记特异性抗体的制备免疫球蛋白(如IgG、IgM)的Fc片段上有糖基存在,因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。
  
  1、将纯化的抗体(IgM或IgG,0.1~1.0ml)在标记缓冲液(0.1Mol/LNaAc,pH值5.5,0.1Mol/LNaCl)中4℃透析过夜。
  
  2、吸取0.5ml至微量离心管中,加过碘酸钠溶液至终浓度为10mMol/L,置冰浴上于暗处孵育30min,使抗体分子上的糖基氧化。
  
  3、将氧化的抗体过PBS平衡的SephadexG25PD-10预装柱,使之与过碘酸钠分开。收集蛋白峰。
  
  4、向抗体管中加入Biotin-LC-hydrazide(Pierce)至终浓度5mMol/L,置混摇器上室温孵育1h。
  
  5、用含0.02%NaN3的PBS平衡SephadexG25预装柱,将生物素标记的抗体分子过柱与游离的生物素分开。收集蛋白峰,保存-20℃。
  
  生物素已经活化,可直接使用,每次可标记0.1-2mg。生物素标记试剂盒中包括用于抗体标记脱盐的Filtrationtube,不用透析,操作简便,熟练操作90min可完成整个标记过程。

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