红细胞裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,它能既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。
裂解液作用原理:
血红细胞表面上有红细胞专属的表面抗原,当裂解液中含可以攻击特定红细胞表面抗原的酶的时候就只会造成红细胞的变形,生物通道扩大膨胀裂解,或者引起红细胞的变形,而不会攻击其他细胞。
另外红细胞有自己的电负性,渗透脆性(通常是一些非酶细胞裂解液的突破点),悬浮稳定性,这都是区别于其他种类细胞的区别点。裂解液就是利用这些特性裂解红细胞的。另外裂解液不能达到100%准确的裂解红细胞,总会或多或少导致其他种类细胞的裂解。
红细胞裂解液的配置方法:
取100μl抗凝全血,加2ml应用液3#,混匀15~20s;加2ml应用液2#,混匀15~20s;加4ml应用液1#,混匀15~20s;300×g离心2min,弃上清;收集沉淀,加PBS缓冲液,制成白细胞悬液,备用。(这种红细胞裂解法满足了白细胞流式细胞仪检测分选要求,价格低廉,是一种简便快捷、经济实用的白细胞纯化分选方法。)
红细胞裂解液保存方法:
1、10x储存液储存于2-8°C不能超过半年(六个月);
2、使用时根据需要稀释,每次用都应用去离子水新鲜配制工作液,当日用不完的可废弃。